1、三級(jí)安全柜使用時(shí)首先用遙控器開啟隔離窗，窗體警報(bào)器隨即響起，當(dāng)窗體向上滑動(dòng)到合適的工作高度時(shí)，警報(bào)聲解除，即可開始工作。
2、三級(jí)安全柜內(nèi)不放與本次實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品，操作前應(yīng)將實(shí)驗(yàn)所需的全部物品移入安全柜（工作用紙，小鼠墊料等易吹起的物品不許放在生物安全柜內(nèi)以免阻塞回風(fēng)隔 柵），避免操作中雙臂頻繁穿過氣幕破壞氣流；并且在移入前用70%酒精擦拭表面消毒，消毒工作臺(tái)面。柜內(nèi)物品擺放應(yīng)做到清潔區(qū)、半污染區(qū)與污染區(qū)分開，在 柜內(nèi)擺放的物品應(yīng)該盡量呈橫向一字?jǐn)[開，操作中物品取用方便，避免回風(fēng)過程中造成交叉污染。物品應(yīng)盡量靠后放置，但不得擋住氣道口，以免干擾氣流正常流動(dòng)。
3、打開風(fēng)機(jī)5～10分鐘，待柜內(nèi)空氣凈化并氣流穩(wěn)定后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。將雙臂應(yīng)該垂直地緩緩伸入安全柜內(nèi)，至少靜止1分鐘，使柜內(nèi)氣流穩(wěn)定后再進(jìn)行操作，柜 內(nèi)操作時(shí)手應(yīng)該盡量平緩移動(dòng)。操作中如確實(shí)需要拿出手臂或物品進(jìn)入，也應(yīng)垂直地緩緩進(jìn)出，且可能接觸感染物品，要對(duì)手套及手臂進(jìn)行表面消毒；
4、避免震動(dòng)原則：柜內(nèi)盡量避免震動(dòng)儀器（例如離心機(jī)、旋渦振蕩器等）的使用，因?yàn)檎饎?dòng)會(huì)使得積留在濾膜上的顆粒物質(zhì)抖落，導(dǎo)致操作室內(nèi)部潔凈度降低，同時(shí)如 果在前操作面平衡失敗還會(huì)引起安全柜對(duì)操作者的污染。如必須則放置在靠近柜內(nèi)后壁1/3處，潔凈的物品應(yīng)放置在距離產(chǎn)生氣溶膠器皿至少150mm外。
5、不同樣品柜內(nèi)移動(dòng)原則：操作和移動(dòng)物品時(shí)應(yīng)按照從清潔區(qū)（低污染性物品）到污染區(qū)（高污染性物品）進(jìn)行，以避免交叉污染。為防可能濺出的液滴，可在臺(tái)面上鋪一用消毒劑浸泡過的毛巾或紗布，但不能覆蓋住安全柜格柵。
6、三級(jí)安全柜內(nèi)操作期間，嚴(yán)禁使用酒精燈等明火，以避免產(chǎn)生的熱氣流干擾柜內(nèi)氣流穩(wěn)定；且明火使用過程中產(chǎn)生的細(xì)小顆粒雜質(zhì)將被帶入濾膜區(qū)域，這些高溫 雜質(zhì)會(huì)損傷HEPA濾膜。無法避免一定需要使用的時(shí)候，宜使用低火苗的本生燈。允許使用微型電加熱器或紅外滅菌器，使用一次性無菌接種環(huán)；
7、工作時(shí)盡量減少背后人員走動(dòng)以及快速開關(guān)房門，以防止安全柜內(nèi)氣流不穩(wěn)定。
8、在實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，不可打開玻璃視窗，應(yīng)保證操作者臉部在工作窗口之上。操作盡量工作臺(tái)中央，稀釋病毒樣本必須在生物安全柜中,不可吹打,在旋渦混勻器上混勻,吹打產(chǎn)生的氣溶膠極易造成整個(gè)試驗(yàn)環(huán)境的污染；將盛有樣品的試管或試盤的表面密封以防止下沉氣流侵襲樣品。
9、三級(jí)安全柜應(yīng)定期進(jìn)行檢測與保養(yǎng)，以保證其正常工作。工作中一旦發(fā)現(xiàn)安全柜工作異常（例如持續(xù)氣流報(bào)警，表明安全柜的正常氣流模式受到了干擾，操作者或物品當(dāng)即處于危險(xiǎn)狀態(tài)），應(yīng)立即停止工作，采取相應(yīng)處理措施，并通知P2管理員。
10、允許全天24小時(shí)工作。連續(xù)工作有助于控制實(shí)驗(yàn)室中灰塵和顆粒的水平；推薦將安全柜一直維持運(yùn)行狀態(tài)。工作*后，關(guān)閉玻璃窗，保持風(fēng)機(jī)繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)10～15分鐘，同時(shí)打開紫外燈，照射30分鐘。
11、要丟棄的、污染的物品應(yīng)暫時(shí)放在安全柜的后部；操作過程中避免將要丟棄的物品放到安全柜外的容器內(nèi)。包括廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較 大的物品，應(yīng)放在某一側(cè)不能拿出安全柜；將所有需要丟棄的物品放入黃色生物安全袋或廢棄物容器內(nèi)，嚴(yán)密封口后方可拿出；柜內(nèi)使用的物品應(yīng)在表面消毒后再取 出，以防止將病原微生物帶出而污染環(huán)境。
12、三級(jí)安全柜應(yīng)定期進(jìn)行清潔消毒，柜內(nèi)臺(tái)面污染物可在工作完成且紫外燈消毒后用2%的84消毒液擦拭。也可用70%酒精并對(duì)工作臺(tái)面、后壁、側(cè)壁, 觀察窗的內(nèi)側(cè)進(jìn)行消毒；柜體外表面則應(yīng)每天用1%的84消毒液擦拭。甲醛蒸汽熏蒸是清除污染常用的方法。
